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HyCyte™Balb/c小鼠骨髓间充质干细胞成软骨诱导分化培养基
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类型
诱导分化试剂
品牌
HyCyte™
货号
BMMB-D203R,BMMB-D203
规格/价格
100mL/1890;100mL即用型/2090;200mL/3190
库存量
300
价格
1890.00

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BMMB-D203R

BMMB-D203


产品简介

骨髓间充质干细胞在诱导培养基的作用下,会逐渐向软骨细胞方向分化,软骨细胞外具有一层富含蛋白多糖的基质,是成软骨分化的标志物,可被阿利辛蓝染成蓝绿色。产品适用于骨髓间充质干细胞成软骨诱导,能显著提高诱导效率。


产品特点

产品性能稳定,可显著提高骨髓间充质干细胞成软骨诱导效率;   同时适用于骨髓间充质干细胞平面诱导和三维诱导; 含染色液,方便使用;即用型产品,开封即可使用,更省时省力。


|   举例说明:成软骨诱导步骤(三维诱导)

(以下步骤仅供参考,详情参见说明书)

1. 间充质干细胞的准备:

将对数生长期的细胞消化下来计数,取3×105个细胞转移到15mL离心管中,250g离心4min。

弃上清,加入0.5mL成软骨诱导分化培养基基础液,重悬细胞,150g离心5min。小心弃去上清,加入0.5mL成软骨诱导分化培养基诱导液,重悬细胞,150g离心5min。

将15mL离心管的管盖稍稍旋开,放置于37℃,5% CO2培养环境下培养。

2. 细胞分化诱导:

24h后观察细胞沉淀形变团聚的情况,如有明显的变化,则小心轻柔地拨动管底,尝试让细胞团脱离管底,全部浸润在诱导液中。

置于37℃,5% CO2培养环境下培养约21天,通常每2天更换一次新鲜配制的成软骨诱导分化培养基诱导液。注意观察细胞团成球情况及表面光滑度,决定终止细胞诱导的时间,并进行染色鉴定。

3. 染色鉴定

a)软骨球固定:将软骨球从离心管中转移至EP管,并使用1×PBS清洗两次,最后置于适量的4%中性甲醛溶液中。

b)石蜡包埋切片:软骨球经石蜡包埋后切片。

c)阿利辛蓝染色:将石蜡切片脱蜡,使用阿利辛蓝染液染色30min,用自来水流水冲洗2min,蒸馏水冲洗1次。

d)诱导评估:显微镜下观察成软骨染色效果,并进行图像采集和诱导评估。诱导成功时,软骨组织中的内酸性粘多糖可被阿利辛蓝染成蓝绿色。


NOTE: 间充质干细胞的成软骨分化水平因细胞类型、细胞供体来源,培养条件、细胞代次、细胞状态和分化时间等因素而异。


|   举例说明:成软骨诱导步骤(平面诱导)

(以下步骤仅供参考,详情参见说明书)

1. 将对数生长期的细胞消化下来计数,成软骨诱导分化培养基细胞重悬细胞,离心后调整细胞密度密度1-2.0×107cells/mL。

2. 20μL悬滴到24孔板中央。(20μL含有4×105细胞)。37℃培养3h使细胞贴壁。

3. 补充200uL诱导分化培养基正常培养,每隔2-3天换液一次。按照以上换液频率诱导21-28天,并注意观察细胞形态变化。

4. 细胞固定:吸去培养基使用适量1×PBS清洗一次,弃去后取适量4%中性甲醛溶液覆盖培养器皿底面,室温固定30-60min,弃去固定液再使用1×PBS清洗两次。

5. 阿利新蓝染色:向清洗干净的诱导孔内加入适量染色液,避光静置染色30min。吸去阿利新蓝染色液,用1×PBS清洗两次,并加入适量1×PBS避免细胞干燥。

6. 诱导评估:显微镜下观察成软骨染色效果,并进行图像采集和诱导评估。诱导成功时,软骨组织中的内酸性粘多糖可被阿利辛蓝染成蓝绿色。


NOTE:间充质干细胞的成软骨分化水平因细胞类型、细胞供体来源,培养条件、细胞代次、细胞状态和分化时间等因素而异。


|   成软骨染色NEW

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