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细胞名称：293T细胞Human EIF2AK3基因敲除株

细胞简称：293T KO-hEIF2AK3

产品货号：CGKO-M2141

修饰基因：hEIF2AK3

修饰类型：敲除

转导方法：质粒电转

抗性基因：Puro

克隆类型：纯合子

细胞鉴定：PCR，测序，WB

种属来源：人

组织来源：胚肾

疾病特征：—

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养体系：DMEM-H+10%FBS+1%P/S

传代比例：1:4-1:8，每2-3天换液一次

传代周期：24-48 h

培养条件：气相：95%空气+5%CO2，温度：37℃

冻存条件：60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO，液氮储存

质量检测：细菌、真菌、支原体检测均为阴性

参考文献：

Letko M, et al. Functional assessment of cell entry and receptor usage for SARS-CoV-2 and other lineage B betacoronaviruses. Nat Microbiol 5(4): 562-569, 2020. PubMed: 32094589

Sena-Esteves M, et al. Single-step conversion of cells to retrovirus vector producers with herpes simplex virus-Epstein-Barr virus hybrid amplicons. J. Virol. 73: 10426-10439, 1999. PubMed: 10559361

Pensiero M, et al. Retroviral vectors produced by producer cell lines resistant to lysis by human serum. US Patent 5,952,225 dated Sep 14 1999

Pensiero M, et al. Retroviral vectors produced by producer cell lines resistant to lysis by human serum. US Patent 6,329,199 dated Dec 11 2001

Pear WS, et al. Production of High-Titer Helper-Free Retroviruses by Transient Transfection. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 8392-8396, 1993. PubMed: 7690960

| 细胞接收后处理方法

1.运输方式：冻存管（默认发送方式）

① 请在收到细胞后，先检查包装是否完整，干冰是否充足，冻存管有无破损等情况，并核对细胞管上的标签信息，细胞管数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

② 收到细胞后如不立即进行实验，则请将细胞放至-80℃或液氮中保存。

③ 实验前开启水浴锅并预热培养基，并备好15mL离心管加入5mL预热后的培养基。

④ 将冻存管置于37℃水浴锅内，快速摇动解冻直到内容物融化，同时需注意避免水面没过管口。

⑤ 将冻存管外壁进行常规消毒后，在超净台内小心开盖，尽量避免气泡溢出，轻柔吹打数次，转移至15mL离心管内。使用1 mL培养基清洗冻存管内壁，一并收集至15mL离心管内。

⑥ 250g离心5min，收集细胞沉淀，弃掉上清并加入2mL完全培养基重悬。

⑦ 取20μL细胞悬液至EP管，台盼蓝染色并计数，记录细胞数量和存活率。如有异常请及时与我们联系，如无台盼蓝，可略过该步骤。

⑧ 将重悬后的细胞接种至合适大小的培养器皿中，放置于培养箱内进行培养。

⑨ 24h后镜下拍照并反馈我们，换液后继续培养。

2.运输方式：培养瓶（贴壁细胞）

① 请在收到细胞后，先检查包装是否完整，有无破损漏液的情况，并核对细胞瓶上的标签信息，细胞瓶数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

② 观察瓶内的培养基是否澄清，镜下观察细胞是否状态良好，并将细胞容器外壁进行常规消毒后，置于培养箱内放置2-3h，让脱壁的细胞可以重新贴附。

③ 小心开盖移去瓶内的培养基，更换为细胞专用的完全培养基，按照培养器皿决定用量。若细胞脱壁过多，可将原培养基离心获得细胞沉淀，再接种回原瓶内。

④ 镜下拍照并反馈我们，如细胞汇合度较低，则放置于培养箱内进行培养。如细胞汇合度达到80%以上，则可按照常规方法进行消化传代。

3.运输方式：培养瓶（悬浮细胞）

① 请在收到细胞后，先检查包装是否完整，有无破损漏液的情况，并核对细胞瓶上的标签信息，细胞瓶数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

② 观察瓶内的培养基是否澄清，镜下观察细胞是否状态良好，拍照并反馈我们。

③ 将细胞容器外壁进行常规消毒后，置于超净工作台内小心开盖。将瓶内的培养基全部转移至若干50 mL离心管内，并清洗培养瓶内壁一并收集。

④ 250g离心5min收集细胞沉淀，弃掉上清，使用新鲜的完全培养基重悬至合适密度。接种至合适的培养器皿中，置于培养箱内培养。

⑤ 培养24h后观察细胞状态和密度，按照常规方法进行传代。

4.运输方式：血清管

① 请在收到细胞后，先检查包装是否完整，有无破损漏液的情况，并核对细胞管上的标签信息，细胞管数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

② 收到细胞后请尽快进行实验，如不能及时处理，请将细胞放至常温环境，通常15-25℃为佳，并尽量在24h内完成实验。否则细胞状态和存活率将会受到一定的影响。

③ 血清管悬液可能会呈现一定程度的浑浊状态，这属于正常现象，请放心操作。

④ 将血清管外壁进行常规消毒后，在超净台内小心开盖，尽量避免气泡溢出，轻柔吹打数次，转移至15mL离心管内。

⑤ 吸取1mL 培养基清洗血清管内壁，同样转移至15mL管，并吹打均匀。

⑥ 取20μL细胞悬液至EP管，台盼蓝染色并计数，记录细胞数量和存活率。如有异常请及时与我们联系，如无台盼蓝，可略过该步骤。

⑦ 250g离心5min，收集细胞沉淀，并接种至合适大小的培养器皿中，放置于培养箱内进行培养。

⑧ 24h后镜下拍照并反馈我们，并根据汇合度继续培养或消化传代。

5.运输方式：“细胞胶囊”技术

① “细胞胶囊”包括细胞管和Buffer共2个试剂管。请在收到细胞后，先检查真空包装袋内的“细胞胶囊”管身是否完好，培养液是否外渗，并核对管身上的标签信息，细胞管数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

②   收到“细胞胶囊”后请尽快进行实验，如不能及时处理，请将细胞放至常温环境，通常15-25℃为佳，并尽量在24 h内完成实验，否则细胞状态和存活率将会受到一定的影响。“细胞胶囊”管内的培养液可能会呈现一定程度的浑浊状态，这属于正常现象，请放心操作。

③ 用75%酒精消毒包装袋表面，在超净台内取出细胞胶囊管和Buffer管，小心的打开细胞胶囊管盖，尽量避免气泡溢出。

④ 使用移液枪将细胞胶囊管中的培养液全部弃去。

⑤ 将Buffer全部加入到细胞胶囊管中，拧紧管盖，上下颠倒3-5 min。

⑥ 观察到细胞胶囊完全溶解后，小心开盖，使用移液枪轻柔吹打数次，转移到15 mL离心管内。

⑦ 取20μL细胞悬液至EP管，台盼蓝染色并计数，记录细胞数量和存活率。如有异常请及时与我们联系。

⑧ 250 g离心4 min，收集细胞沉淀，并接种到合适大小的培养器皿中，放置于培养箱内进行培养。

⑨ 24 h 后显微镜下观察细胞状态，观察细胞时请拍100×、200×各2-3张照片进行留存，所拍照片应尽量清晰，并根据汇合度继续培养或消化传代。