病毒包装，载体构建，怎么选？

海星生物
2022-04-01

病毒载体是科研工作者最常用的载体工具，目前最常用的有四类病毒载体慢病毒（lentivirus，LV），腺病毒（ Adenovirus，AV）腺相关病毒（Adeno-associated virus，AAV）   以及逆转录病毒（ retrovirus），其中，慢病毒，腺病毒以及腺相关病毒在基因治疗领域的应用越来越广泛。


慢病毒由人类免疫缺陷（Human immunodeficiency virus,HIV）病毒改造而成，基因组大小9.2kb,由于安全性等因素，慢病毒目前已经发展至第三代四质粒系统，也就是海星生物正在使用的质粒系统；AAV属于微小病毒科，为单链的DNA病毒，有发卡区域，可以保护病毒载体在细胞内长期存在，不整合到基因组。腺病毒为线性双链DNA病毒，免疫原性高于慢病毒，表达时间快，1-2天即可有较好的表达。


下面是小海星为大家整理的三种病毒的区别以及优劣势：



慢病毒腺病毒AAV
病毒基因组ssRNAdsDNAssDNA
组织嗜性广泛hAd5只感染表达CAR受体的细胞取决于血清型
是否可感染非分裂细胞是是是
病毒基因组稳定整合抑
或游离于宿主基因组		稳定整合游离的DNA附加体形式游离的DNA附加体形式
插入片段大小6.4kb7.5kb4.2kb
自定义启动子是是是
滴度10^8-10^9 TU/mL10^12PFU/mL10^12-10^13GC/mL
外源基因表达时间2-4天开始表达，长期稳定表达1-2天开始表达，作用时间2周左右7-14天开始表达，稳定表达3-6个月
体内免疫反应低高非常低
应用细胞实验和体内实验原代细胞，体内实验体内实验


慢病毒（LV）腺病毒（AV）腺相关病毒（AAV）
优势：
● **整合到基因组中，便于稳转株的构建，持续传代
● 宿主广，对多种细胞系有广泛的嗜亲性，包抱分裂和不分裂的细胞
● 生物安全性高
● 免疫原性低，适用于动物体内实验		 优势：
● 病毒滴度高
● 外源基因承载量较大，-38.7kb(5`ITR to
   3`ITR).     可用7.5kb左右
● 生物安全性高
● 宿主细胞较广泛，可感染分裂和非分裂细胞
● 对于原代细胞具有很好的感染特性
优势：
● 安全性高：迄今从未发现野生型AAV对人   体致命，重组AAV基因组序列上去除了大部分的野型AAV基因组元件，进一步保证了安全性
● 表达时间长
● 免疫原性低
● 特异性强，具体数十种血清型。

● 物理性质稳定：在60℃不能被灭活，能抗氯仿

● 滴度高

劣势：
● 病毒承载量有限：可用6.4kb; 无包膜，
    易失活		劣势：
● 病毒基因组不整合，分裂细胞中会丢失
● 某些类型细胞感染效果差
● 免疫原性强，动物中可能引起免疫反应		劣势：
● 容量较小，ITR之间4.7kb.可用4.2kb


还有大家关注的AAV血清型和组织噬性，小海星也给大家做了整理，海星生物有十几种的血清型，例如外周神经系统 AAV-PHP.S更适用于外周神经系统，肝脏常用AAV8，AAV在组织中的转导效果可以持续3-6周，并且通常在注射后2-4周可以达到表达峰值。


不同类型AAV适用组织-1.png

image.png


看到这里，大家现在应该知道怎么选择合适的病毒载体进行病毒包装，从而为您的科研达到最理想的实验效果。

有需要可关注联系小海星获得更多的技术指导和服务哦！


分享