上皮组织覆盖于人体所有体表及体腔表面，构成皮肤、呼吸道、消化道、血管内壁以及肝脏、乳腺等器官的功能单位。作为人体于外界环境的“智能屏障”，上皮细胞承担着吸收、分泌、感知和保护等多重生理功能。

然而，在体内研究上皮细胞异常复杂，它受到神经、免疫、循环等多种系统的综合影响。因此，在体外提取分离上皮细胞成为生物医学不可或缺的工具。

原代上皮细胞直接来源于新鲜组织，**程度保留了体内原有的生物学特性、极化结构和分化功能，是连接体外实验与体内真实生理病理状态的核心桥梁。

• 在疾病研究中，可构建肿瘤、纤维化、病毒感染等病理模型，助力发病机制探索；

• 在药物研发领域，皮肤、肠道等来源的原代上皮细胞可评估药物吸收、毒性及疗效的“金标准”体外模型；

• 在再生医学与组织工程中，可为角膜修复、皮肤移植和类器官构建提供关键细胞材料。

与传统细胞系相比，原代细胞**的优势在于它最接近体内真实状态，保留原有的生物学特性。

1.取材与预处理

颈部脱臼法处死妊娠第4天的孕鼠，在无菌条件下摘取小鼠的子宫，在超净工作台中将子宫组织在无钙、镁的0.01M PBS中洗去血块和黏液，在解剖镜下小心剔除子宫周围附着的脂肪、血管等结缔组织。

2.获取子宫内膜与酶消化

在解剖镜下沿子宫腔将其纵向切开，内膜面朝上展平于培养皿中，加入1mg/mL Ⅰ型胶原酶在37℃下消化30min，期间可振荡数次。

3.终止消化与细胞收集

消化结束后移液枪轻轻吹打组织块，期间可舍弃部分大块组织，加入等体积完全培养液终止消化，将消化后的细胞悬液经70目筛网过滤，除去黏液和未消化的组织，将消化液转移至含50mL PBS的离心管中静置10min；

4.纯化

500×g离心10min，离心结束后弃去上清液，加入完全培养基重悬细胞，再次离心10min，重复清洗操作2次后，将重悬后的细胞铺在培养皿中进行原代培养，放置于37℃、5%CO2培养箱中静置培养。

5.培养

使用HyCyte^®通用型上皮细胞完全培养基进行培养。24h后细胞开始贴壁，此后每2~3天换液一次，可传2-3代。

6. 鉴定

海星生物（HySigen）通过免疫荧光染色进行鉴定，上皮细胞标志物广谱角蛋白（PCK）染色呈阳性；细胞纯度达90%以上；微生物检测应显示不含细菌、真菌等污染。

1.剔除干净子宫周围的结缔组织，并精准获取内膜层，是减少成纤维细胞污染、获得高纯度上皮细胞的关键。

2.严格控制消化时间，建议每10min在显微镜下观察一次，避免时间太长造成细胞膜被破坏。

3.消化过程中可每隔10min轻轻摇晃或吹打，帮助组织块分散，但动作要轻柔，避免暴力吹打造成机械损伤。

海星生物深耕基因编辑与细胞生物技术的研发型科技公司，建有超过1200平米的研发平台及GMP-Like细胞实验室。海星生物提供人、小鼠、大鼠、兔、猪等多物种来源的原代上皮细胞，且所有原代细胞均取自新鲜组织，确保细胞的高活性；所有原代细胞经免疫荧光染色鉴定角蛋白均呈阳性，细胞纯度可达90%以上；所有产品均通过细菌、真菌、支原体等微生物检测。同时还提供原代细胞定制服务。

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在原代上皮细胞的提取、分离与培养中，每一环节都考验着实验者的耐心与技术。而让这一切努力真正落地的，是一瓶值得信赖的培养基。通用型上皮细胞完全培养基EpiCM由海星生物技术团队精心优化，经过长期测试，本产品可保持上皮细胞**的生长状态，有效提高细胞增殖速度，维持上皮细胞的性能。本产品中已包含上皮细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于上皮细胞的体外培养。

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