人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)培养要点与常见问题

2026-01-13
SH-SY5Y细胞培养要点

1. ⼈神经⺟细胞瘤细胞（SH-SY5Y）为半贴半悬细胞，SH-SY5Y细胞群中⼤多数为贴壁细胞，极少数为悬浮细胞；成簇⽣⻓和贴壁性差。

2. SH-SY5Y传代周期较⻓，倍增时间约为72h。这是因为SH-SY5Y贴壁和⽣⻓都较为缓慢。按1:4传代的情况下，约⼀周传代2~3次。

3. SH-SY5Y培养注意事项：

① 该细胞容易聚团，培养2~3天后细胞可正常贴壁；
② 细胞聚团严重影响细胞⽣⻓后，可⽤胰酶消化细胞使之重新分散，传代后少动少换液（48 h内尽量勿动），聚团会有改善。

4. SH-SY5Y贴壁缓慢，在标准培养条件【DMEM/F12＋15%FBS＋1% P/S】下，接种后需要48⼩时以上完成贴壁。推荐接种后第三天再换液。期间不要频

繁观察或晃动培养⽫。如还未贴壁，需使⽤HyCyte® 0.1%明胶溶液（GUGL-R001）来包被T25培养瓶，从⽽使细胞较好地贴壁，具体步骤如下：

① 使⽤2-3mL的HyCyte® 0.1%明胶平铺T25瓶底⾯即可；
② 37℃培养箱内包被0.5h;
③ 包被结束后吸去明胶 0.1%明胶;
④ 晾干包被的器皿后再使用。
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SH-SY5Y细胞常见问题处理方法

1. 如何预防SH-SY5Y细胞成团？

SH-SY5Y细胞非常敏感，在受到温度、化学或物理刺激后容易出现成团现象。一个视野下，有少量成团现象，无需特殊处理。成团几乎没有铺展开的细胞时，就需要按以下方法特殊处理一下了。

① 成团处理方法：
方法1：低密度接种，用0.125%的低浓度胰蛋白酶消化细胞（时间不超过5min），按1：6比例传代接种，并换新的培养器皿。延长换液时间，3天换液一次，防止细胞脱落。
方法2：使用多聚赖氨酸包被的培养器皿，以加快细胞贴壁速度，降低细胞聚集成团的几率。

方法3：重新铺板，并更换新配制的培养基，并加大血清比例（不超过20%）

方法4：接种时，减少培养基量（如T25加3mL）以加快细胞贴壁速度，等待细胞贴壁后（约8-12小时），再补加培养基。


② 预防成团的方法：

· 控制细胞密度不超过80%，当密度到达或超过80%及时传代；传代时切勿暴力吹打，避免对细胞造成机械刺激

· 使用质量好的培养基和胎牛血清，减少内毒素等有害物质对细胞的刺激

· 请勿频繁把细胞从培养箱拿出，气温低时需开暖气维持细胞房温度；使用PBS、培养基前37度预热，以避免温差对细胞造成刺激

2. SH-SY5Y细胞出现皱缩、脱落如何处理?
① SH-SY5Y细胞出现皱缩处理方法

常温细胞拿到后，把细胞放进培养箱静置2-4小时即可。

如果4小时后细胞仍然没有铺展开，密度适中的前提下可以放培养箱中静置过夜(过夜前倒出部分培养基，留5-10mL在瓶中，瓶盖拧松)。

② SH-SY5Y细胞出现脱落处理方法

常温细胞拿到后，先把细胞放进培养箱静置2-4小时以稳定状态再处理。

脱落后的细胞通常聚团漂浮，通过离心将漂浮的细胞团收集起来，在离心管里进行胰酶消化后重新铺板即可。

SH-SY5Y细胞皱缩、脱落状态

SH-SY5Y 已发表过的文章：

IF=3.6 Mengzhen Z, Xinwei H, Zeheng T, et al. Integrated machine learning-driven disulfidptosis profiling: CYFIP1 and EMILIN1 as therapeutic nodes in neuroblastoma[J]. Journal of Cancer Research and Clinical Oncology, 2024, 150(3): 109.

IF=3.6 Feng J, Zhao J, Kuang Y, et al. Hsa_Circ_0105596/FTO inhibits progression of Parkinson's disease by sponging miR-187-3p and regulating eEF2[J]. Heliyon, 2024, 10(23).

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