| CRISPRa(基因激活)/CRISPRi(基因抑制/沉默)系统

是用于激活/抑制内源性基因转录的强大工具：

1、通过3病毒系统转导，效率更高；

2、可以通过多个sgRNA筛选，获得适合的效果；

3、直接在启动子作用，不受转录本限制；

4、超大基因过表达的理想选择；

5、能够稳定传代，表型稳定；

| CRISPRa（基因激活）系统

是用于激活内源性基因转录的强大工具，切割失活的Cas9（dCas9）连上转录激活子（如VP64、p65和HSF1），可以有效促进基因组特定位点的转录。研究显示，CRISPRa技术可以使得基因的转录得到了两倍到数千倍的增长，许多基因的活性甚至有了几个数量级的增加。

服务内容

客户提供相关的需要激活表达的基因信息，海星生物将按照基因的生物信息特点，设计gRNA、构建载体、包装病毒通过病毒转染到目的细胞，筛选出激高表达或者合适的gRNA序列，并构建成CRISPRa稳转细胞株，并使用Q-PCR对目的基因表达量进行检测，并依据客户的需求提供单克隆建立和表型的筛选服务。

CRISPRa技术服务的流程

服务优势

通过内源基因组背景进行激活，激活表达量可以从2倍到几个数量级的提升。

CRISPRa vs ORF过表达

| CRISPRi （基因抑制/沉默）系统

是用于抑制内源性基因转录的强大工具，当dCas9（没有切割活性的Cas9）被引导到靶基因的转录起始位点TSS（transcription start site）时，dCas9能够物理性阻碍RNA聚合酶的通过，导致基因沉默。同时dCas9融合了一个基因抑制结构域，如KRAB结构域，这样的蛋白称之为dCas9-KRAB，可以进一步提高转录抑制的效率。此外，dCas9也可以融合双抑制结构域KRAB-MeCP2，抑制效果更佳。

由于dCas9-KRAB CRISPRi系统是在DNA水平抑制基因表达，因此适用于多种类型的基因，包括：mRNA、非编码RNA、microRNA、反义转录本、核定位RNA以及聚合酶III 转录本等基因的转录抑制。

CRISPRi显著的转录抑制效果

服务内容

客户只需要提供要进行敲减的基因和转录本信息，将有海星生物设计gRNA序列，构建病毒载体，病毒包装后转染目的细胞，并根据客户的需求进行筛选出符合敲减水平低gRNA，并提供CRISPRi稳转细胞株的构建和单克隆的扩增筛选的服务。

技术优势

不改变内源基因组背景、基因抑制效果可筛选、适用更多基因种类。

RNAi vs CRISPRi

研究基因功能常见的方法是，减少或者阻断基因表达，然后进行表型分析。RNAi和CRISPRi都是常用的基因表达水平敲低的研究工具。

RNA干扰（RNAi）靶向细胞质中成熟的RNA，而CRISPRi则在细胞核内阻止转录的起始，因而敲低效果更为显著。此外RNAi的脱靶效应要远远高于CRISPRi。

CRISPRi的敲低效果显著优于RNAi

HyCyte® | 海星生物