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发货周期：

干冰冻存管运输3天（1x10⁶cells/冻存管x2）

常温运温1-2周发货 (1x10⁶ cells/T25培养瓶）

bEnd.3细胞是一种小鼠脑微血管内皮细胞系，源自C3H小鼠脑皮质毛细血管内皮细胞，通过SV40大T抗原转导建立。经此改造后，该细胞系表现出稳定的内皮细胞特性且易于培养，目前已广泛应用于以下领域：血脑屏障（BBB）研究；药物渗透与转运研究；炎症与免疫反应研究；血管生成与细胞迁移研究；神经退行性疾病模型构建。

bEnd.3细胞作为血脑屏障研究的经典模型，凭借其稳定的内皮功能、可靠的屏障特性和多功能性，在神经退行性疾病、药物渗透和炎症反应研究中具有重要地位。本公司提供的bEnd.3细胞经过STR鉴定和血脑屏障模型验证，质量可靠，实验结果重现性强，适用于Transwell血脑屏障模型、药物渗透及血管生成等多种实验场景。

细胞名称：小鼠脑微血管内皮细胞(经体外血管形成实验验证)【STR鉴定报告可咨询获取】

细胞简称：bEnd.3

产品货号：TCM-C715-UD

种属来源：小鼠

组织来源：脑

疾病特征：—

细胞形态：上皮样　

生长特性：贴壁生长

培养体系：DMEM-H+10%FBS+1%P/S

配套培养基货号：TCM-G715

传代比例：1:4-1:6，每2-3天换液一次

倍增时间：24-32 h

培养条件：气相：95%空气+5%CO2，温度：37℃

冻存条件：60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO，液氮储存

质量检测：细菌、真菌、支原体检测均为阴性

bEnd.3细胞培养要点：

1. bEnd.3细胞最常遇到的问题就是细胞形态变化和难消化；

2. 细胞形态：bEnd.3细胞本身生长较慢，在低密度时会呈现不规则细胞形态，高密度时则呈规则纤维状，所以若在培养过程中发现细胞形态异常，则有可能是细胞密度低，建议细胞铺满密度较高时传代。

bEnd.3细胞不同密度培养图片

3. 消化问题：bEnd.3细胞培养时间越长越难消化，培养4天传代，一般消化3-5分钟；培养7天传代，一般消化5-10分钟。具体消化时间以显微镜下观察细胞状态为准。

    如遇到消化困难不必担心，可通过分次消化的方式解决，具体操作方法如下（以T25瓶细胞为例）：

(1) 吸出原培养液；

(2) 加入2mL左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸出PBS丢弃；

(3) 加入1mL左右胰酶，轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞；

(4) 放入培养箱消化，消化3-5分钟（根据具体细胞稍作延长或缩短），显微镜下看到细胞开始漂浮，可以加入2mLPBS，晃动培养瓶使细胞悬浮，不要吹打剩下的贴壁细胞；

(5) 吸出培养瓶内的PBS和细胞悬液，转移到无菌离心管中，在离心管中加入3mL含血清的培养基终止消化并吹散细胞，使细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液；

(6) 原培养瓶中加入0.5mL胰酶，晃动培养瓶浸润细胞，放入培养箱继续消化，直到细胞块中间全部收缩变圆，晃动培养瓶可脱落；

(7) 用3mL含血清的培养基终止消化，将瓶底的细胞全部吹下，并轻轻吹吸分散细胞呈单颗；

(8) 收集细胞悬液与**次消化下来的细胞合并到一个离心管；

(9) 离心收集细胞沉淀，1100rpm/min 4分钟，离心完吸出上清丢弃；

(10) 加入新鲜培养基，吹打几下混匀细胞，按需接种到新培养瓶，补足培养基，拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养；

(11) 检查培养箱二氧化碳，温度和水盘。

4. 培养注意事项

(1) 细胞培养过程中形态多样，低密度时容易出现放射状细胞，看似已经铺满瓶底，其实细胞量较少，需要细胞胞体排列紧密的时候进行传代；

(2) 细胞培养过程中避免频繁换液，可以每隔2-3天换液或者半量换液一次；

(3) 培养过程中会产生10%左右活的单颗漂浮细胞，贴壁细胞密度偏低时，注意收集悬浮细胞，贴壁细胞密度偏高时，可以换液时丢弃；

(4) 接种量对细胞生长有影响，接种量过低细胞会有增殖缓慢，漂浮过多的现象，请注意控制传代比例；

(5) 细胞对温度和pH较敏感，传代或换液前培养基可以常温复温4小时以上；避免使用pH改变（偏酸：颜色偏黄；偏碱：颜色偏紫红）的培养基；

(6) 细胞传代过程中若出现单次消化时间过长，可进行分次消化，切不可将细胞强行吹下来，以避免吹打造成细胞机械损伤。

收货当天如何处理细胞？

收到细胞后请务必仔细阅读产品资料，了解细胞相关信息，如贴壁特性 (贴壁/悬浮/半贴壁半悬浮)、细胞形态、培养体系、传代比例和换液频率等。