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细胞名称：THP-1细胞CARD10基因敲除株

细胞简称：THP-1 KO-CARD10

产品货号：CGKO-M2205

修饰基因：CARD10(29775)

修饰类型：敲除

转导方法：蛋白电转

抗性基因：—

克隆类型：纯合子

细胞鉴定：PCR，测序，WB

种属来源：人

组织来源：外周血

疾病特征：急性单核细胞白血病

细胞形态：单核细胞样

生长特性：悬浮生长

培养体系：RPMI-1640+10%FBS+0.05 mM β-mercaptoethanol+1%P/S

传代比例：1:3-1:6，每2-3天换液一次

传代周期：24-48 h

培养条件：气相：95%空气+5%CO2，温度：37℃

冻存条件：60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO，液氮储存

质量检测：细菌、真菌、支原体检测均为阴性

参考文献：

Tsuchiya S, et al. Induction of maturation in cultured human monocytic leukemia cells by a phorbol diester. Cancer Res. 42: 1530-1536, 1982. PubMed: 6949641

Skubitz KM, et al. Human granulocyte surface molecules identified by murine monoclonal antibodies. J. Immunol. 131: 1882-1888, 1983. PubMed: 6619543

Cuthbert JA, Lipsky PE. Regulation of proliferation and Ras localization in transformed cells by products of mevalonate metabolism. Cancer Res. 57: 3498-3504, 1997. PubMed: 9270019

Huang S, et al. Adenovirus interaction with distinct integrins mediates separate events in cell entry and gene delivery to hematopoietic cells. J. Virol. 70: 4502-4508, 1996. PubMed: 8676475

Clark RA, et al. Tenascin supports lymphocyte rolling. J. Cell Biol. 137: 755-765, 1997. PubMed: 9151679

Hambleton J, et al. Activation of c-Jun N-terminal kinase in bacterial lipopolysaccharide-stimulated macrophages. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 2774-2778, 1996. PubMed: 8610116

Hsu HY, et al. Inhibition of macrophage scavenger receptor activity by tumor necrosis factor-alpha is transcriptionally and post-transcriptionally regulated. J. Biol. Chem. 271: 7767-7773, 1996. PubMed: 8631819

Lucas M, Mazzone T. Cell surface proteoglycans modulate net synthesis and secretion of macrophage apolipoprotein E. J. Biol. Chem. 271: 13454-13460, 1996. PubMed: 8662812

Sando GN, et al. Induction of ceramide glucosyltransferase activity in cultured human keratinocytes. J. Biol. Chem. 271: 22044-22051, 1996. PubMed: 8703011

Ollivier V, et al. Elevated cyclic AMP inhibits NF-kappaB-mediated transcription in human monocytic cells and endothelial cells. J. Biol. Chem. 271: 20828-20835, 1996. PubMed: 8702838

Tsuchiya S, et al. Establishment and characterization of a human acute monocytic leukemia cell line (THP-1). Int. J. Cancer 26: 171-176, 1980. PubMed: 6970727

|   细胞接收后处理方法

1.运输方式：冻存管（默认发送方式）

① 请在收到细胞后，先检查包装是否完整，干冰是否充足，冻存管有无破损等情况，并核对细胞管上的标签信息，细胞管数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

② 收到细胞后如不立即进行实验，则请将细胞放至-80℃或液氮中保存。

③ 实验前开启水浴锅并预热培养基，并备好15mL离心管加入5mL预热后的培养基。

④ 将冻存管置于37℃水浴锅内，快速摇动解冻直到内容物融化，同时需注意避免水面没过管口。

⑤ 将冻存管外壁进行常规消毒后，在超净台内小心开盖，尽量避免气泡溢出，轻柔吹打数次，转移至15mL离心管内。使用1 mL培养基清洗冻存管内壁，一并收集至15mL离心管内。

⑥ 250g离心5min，收集细胞沉淀，弃掉上清并加入2mL完全培养基重悬。

⑦ 取20μL细胞悬液至EP管，台盼蓝染色并计数，记录细胞数量和存活率。如有异常请及时与我们联系，如无台盼蓝，可略过该步骤。

⑧ 将重悬后的细胞接种至合适大小的培养器皿中，放置于培养箱内进行培养。

⑨ 24h后镜下拍照并反馈我们，换液后继续培养。

2.运输方式：培养瓶（贴壁细胞）

① 请在收到细胞后，先检查包装是否完整，有无破损漏液的情况，并核对细胞瓶上的标签信息，细胞瓶数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

② 观察瓶内的培养基是否澄清，镜下观察细胞是否状态良好，并将细胞容器外壁进行常规消毒后，置于培养箱内放置2-3h，让脱壁的细胞可以重新贴附。

③ 小心开盖移去瓶内的培养基，更换为细胞专用的完全培养基，按照培养器皿决定用量。若细胞脱壁过多，可将原培养基离心获得细胞沉淀，再接种回原瓶内。

④ 镜下拍照并反馈我们，如细胞汇合度较低，则放置于培养箱内进行培养。如细胞汇合度达到80%以上，则可按照常规方法进行消化传代。

3.运输方式：培养瓶（悬浮细胞）

① 请在收到细胞后，先检查包装是否完整，有无破损漏液的情况，并核对细胞瓶上的标签信息，细胞瓶数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

② 观察瓶内的培养基是否澄清，镜下观察细胞是否状态良好，拍照并反馈我们。

③ 将细胞容器外壁进行常规消毒后，置于超净工作台内小心开盖。将瓶内的培养基全部转移至若干50 mL离心管内，并清洗培养瓶内壁一并收集。

④ 250g离心5min收集细胞沉淀，弃掉上清，使用新鲜的完全培养基重悬至合适密度。接种至合适的培养器皿中，置于培养箱内培养。

⑤ 培养24h后观察细胞状态和密度，按照常规方法进行传代。

4.运输方式：血清管

① 请在收到细胞后，先检查包装是否完整，有无破损漏液的情况，并核对细胞管上的标签信息，细胞管数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

② 收到细胞后请尽快进行实验，如不能及时处理，请将细胞放至常温环境，通常15-25℃为佳，并尽量在24h内完成实验。否则细胞状态和存活率将会受到一定的影响。

③ 血清管悬液可能会呈现一定程度的浑浊状态，这属于正常现象，请放心操作。

④ 将血清管外壁进行常规消毒后，在超净台内小心开盖，尽量避免气泡溢出，轻柔吹打数次，转移至15mL离心管内。

⑤ 吸取1mL 培养基清洗血清管内壁，同样转移至15mL管，并吹打均匀。

⑥ 取20μL细胞悬液至EP管，台盼蓝染色并计数，记录细胞数量和存活率。如有异常请及时与我们联系，如无台盼蓝，可略过该步骤。

⑦ 250g离心5min，收集细胞沉淀，并接种至合适大小的培养器皿中，放置于培养箱内进行培养。

⑧ 24h后镜下拍照并反馈我们，并根据汇合度继续培养或消化传代。

5.运输方式：“细胞胶囊”技术

① “细胞胶囊”包括细胞管和Buffer共2个试剂管。请在收到细胞后，先检查真空包装袋内的“细胞胶囊”管身是否完好，培养液是否外渗，并核对管身上的标签信息，细胞管数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

②   收到“细胞胶囊”后请尽快进行实验，如不能及时处理，请将细胞放至常温环境，通常15-25℃为佳，并尽量在24 h内完成实验，否则细胞状态和存活率将会受到一定的影响。“细胞胶囊”管内的培养液可能会呈现一定程度的浑浊状态，这属于正常现象，请放心操作。

③ 用75%酒精消毒包装袋表面，在超净台内取出细胞胶囊管和Buffer管，小心的打开细胞胶囊管盖，尽量避免气泡溢出。

④ 使用移液枪将细胞胶囊管中的培养液全部弃去。

⑤ 将Buffer全部加入到细胞胶囊管中，拧紧管盖，上下颠倒3-5 min。

⑥ 观察到细胞胶囊完全溶解后，小心开盖，使用移液枪轻柔吹打数次，转移到15 mL离心管内。

⑦ 取20μL细胞悬液至EP管，台盼蓝染色并计数，记录细胞数量和存活率。如有异常请及时与我们联系。

⑧ 250 g离心4 min，收集细胞沉淀，并接种到合适大小的培养器皿中，放置于培养箱内进行培养。

⑨ 24 h 后显微镜下观察细胞状态，观察细胞时请拍100×、200×各2-3张照片进行留存，所拍照片应尽量清晰，并根据汇合度继续培养或消化传代。