【海星第三代功能验证细胞库】bEnd.3经体外血管形成实验验证
【海星第三代功能验证细胞库】
第七期：小鼠脑管内皮细胞(bEnd.3
第七期：小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)
海星第三代功能验证细胞—bEnd.3细胞
经体外血管形成实验验证
bEnd.3细胞是一种源自BALB/c小鼠脑微血管内皮的转化细胞系，具有典型的内皮细胞特性。bEnd.3细胞通过转染表达多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆转录病毒载体，获得了内皮细胞特征，其形态呈现内皮细胞样式，喜贴壁生长。通过观察von Willebrand因子的表达以及荧光标记的低密度脂蛋白（LDL）的摄取，可以验证其内皮细胞特性。
bEnd.3细胞系血管形成实验-形态学结果
小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)
(经体外血管形成实验验证)培养注意要点
1. bEnd.3细胞最常遇到的问题就是细胞形态变化和难消化；
2. 细胞形态：bEnd.3细胞本身生长较慢，在低密度时会呈现不规则细胞形态，高密度时则呈规则纤维状，所以若在培养过程中发现细胞形态异常，则有可能是细胞密度低，建议细胞铺满密度较高时传代。
3. 细胞培养过程中形态多样，低密度时容易出现放射状细胞，看似已经铺满瓶底，其实细胞量较少，需要细胞胞体排列紧密的时候进行传代；
4. 细胞培养过程中避免频繁换液，可以每隔2-3天换液或者半量换液一次；
5. 培养过程中会产生10%左右活的单颗漂浮细胞，贴壁细胞密度偏低时，注意收集悬浮细胞，贴壁细胞密度偏高时，可以换液时丢弃；
6. 接种量对细胞生长有影响，接种量过低细胞会有增殖缓慢，漂浮过多的现象，请注意控制传代比例；
7. 细胞对温度和pH较敏感，传代或换液前培养基可以常温复温4小时以上；避免使用pH改变（偏酸：颜色偏黄；偏碱：颜色偏紫红）的培养基；
8. 细胞传代过程中若出现单次消化时间过长，可进行分次消化，切不可将细胞强行吹下来，以避免吹打造成细胞机械损伤。
小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)
(经体外血管形成实验验证)常见问题及解决方法
1. 培养过程中出现黑点正常吗？
细胞在培养过程中会分泌一定量的细胞代谢物，在镜下通常呈现出规律运动的黑点，若黑点没有增多，培养基未变浑浊且细胞生长正常，可通过换液去除，不影响细胞的正常生长和其余实验操作。
2. 培养过程中细胞生长缓慢正常吗？
若为冻存管复苏细胞的1~2代，细胞生长缓慢属于正常状态；更换培养基也会导致细胞生长缓慢，需适应1~2代即可恢复常规生长速度；若一直无改善，考虑细胞是否代次过高或是否有支原体引入。
3. 细胞消化时间不一样正常吗？
bEnd.3细胞培养时间越长越难消化，培养4天传代，一般消化3-5分钟；培养7天传代，一般消化5-10分钟。具体消化时间以显微镜下观察细胞状态为准。
如遇到消化困难不必担心，可通过分次消化的方式解决，具体操作方法如下（以T25瓶细胞为例）：
(1) 吸出原培养液；
(2) 加入2mL左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸出PBS丢弃；
(3) 加入1mL左右胰酶，轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞；
(4) 放入培养箱消化，消化3-5分钟（根据具体细胞稍作延长或缩短），显微镜下看到细胞开始漂浮，可以加入2mLPBS，晃动培养瓶使细胞悬浮，不要吹打剩下的贴壁细胞；
(5) 吸出培养瓶内的PBS和细胞悬液，转移到无菌离心管中，在离心管中加入3mL含血清的培养基终止消化并吹散细胞，使细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液；
(6) 原培养瓶中加入0.5mL胰酶，晃动培养瓶浸润细胞，放入培养箱继续消化，直到细胞块中间全部收缩变圆，晃动培养瓶可脱落；
(7) 用3mL含血清的培养基终止消化，将瓶底的细胞全部吹下，并轻轻吹吸分散细胞呈单颗；
(8) 收集细胞悬液与**次消化下来的细胞合并到一个离心管；
(9) 离心收集细胞沉淀，1100rpm/min 4分钟，离心完吸出上清丢弃；
(10) 加入新鲜培养基，吹打几下混匀细胞，按需接种到新培养瓶，补足培养基，拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养；
(11) 检查培养箱二氧化碳，温度和水盘。
技术护航：从细胞到数据，全程无忧
海星生物第三代功能验证细胞库的 bEnd.3 细胞，通过STR 鉴定、支原体检测、体外血管形成实验三级验证体系，确保细胞身份精准、无污染且功能稳定。
验证更全面：采用 STR + 支原体 + 功能的三级验证体系，确保文献级功能稳定性。
批次一致性高：不同批次细胞的体外成管效率差异＜10%，避免因细胞功能波动导致的实验误差。
配套支持完善：提供详细的体外血管形成实验操作手册及验证报告，同时采用德国纳米技术干冰桶运输，保障细胞复苏存活率＞85%。
应用适配性广：除血管形成研究外，可直接用于血脑屏障通透性检测、药物转运实验等，覆盖基础研究到药物开发的全场景需求。
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