人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)培养要点

2025-12-04

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SH-SY5Y细胞是于1970年建自骨瘤转移灶的神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系经3次克隆后的亚系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。SH-SY5Y细胞显示中等水平的多巴胺-β-羟基酶活性。

SH-SY5Y细胞是一种源于人神经母细胞瘤的细胞系,是神经科学研究中广泛使用的体外模型。它主要应用于:神经退行性疾病研究、神经毒性评估、神经分化和发育研究、癌症研究、药物筛选和毒理学。
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细胞名称:人神经母细胞瘤细胞(STR鉴定正确)

细胞简称SH-SY5Y

产品货号:TCH-C325

种属来源:

组织来源:

疾病特征:脑神经母细胞瘤

细胞形态:上皮样 

生长特性:半贴半悬

培养体系:DMEM/F12+15% FBS+1% P/S

配套培养基货号:TCH-G325

传代比例:1:3-1:4,每2-3天换液一次

倍增时间:48-72h

培养条件:气相:95%空气+5%CO2,温度:37℃

冻存条件:60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO,液氮储存

质量检测:细菌、真菌、支原体检测均为阴性


SH-SY5Y细胞培养要点

1. ⼈神经⺟细胞瘤细胞(SH-SY5Y)为半贴半悬细胞,SH-SY5Y细胞群中⼤多数为贴壁细胞,极少数为悬浮细胞;成簇⽣⻓和贴壁性差。

2. SH-SY5Y传代周期较⻓,倍增时间约为72h。这是因为SH-SY5Y贴壁和⽣⻓都较为缓慢。按1:4传代的情况下,约⼀周传代2~3次。

3. SH-SY5Y培养注意事项:

① 该细胞容易聚团,培养2~3天后细胞可正常贴壁;
细胞聚团严重影响细胞⽣⻓后,可⽤胰酶消化细胞使之重新分散,传代后少动少换液(48 h内尽量勿动),聚团会有改善。

4. SH-SY5Y贴壁缓慢,在标准培养条件【DMEM/F12+15%FBS+1% P/S】下,接种后需要48⼩时以上完成贴壁。推荐接种后第三天再换液。期间不要频

繁观察或晃动培养⽫。如还未贴壁,需使⽤HyCyte® 0.1%明胶溶液GUGL-R001来包被T25培养瓶,从⽽使细胞较好地贴壁,具体步骤如下:

① 使⽤2-3mL的HyCyte® 0.1%明胶平铺T25瓶底⾯即可;
② 37℃培养箱内包被0.5h;
③ 包被结束后吸去明胶 0.1%明胶;
晾干包被的器皿后再使用。
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5. ⾎清质量差异可能引起细胞状态变化,建议选⽤⾼质量的胎⽜⾎清。

6. 降低SH-SY5Y成簇⽣⻓和贴壁性差的因素有:

① 培养基和⾎清的选择;
避免过汇合;

避免频繁移动;

传代⽐例不宜过低;
⑤ 减少机械⼒损伤。
7. SH-SY5Y细胞若在复苏或传代后出现聚团现象,则可能是胰酶消化不当,或铺瓶不匀导致。建议在消化终⽌后可⽤移液枪轻柔吹打10-20次,当⽆⾁眼可⻅的团块时再进⾏离⼼操作;⽤培养基重悬离⼼后的细胞沉淀时,需吹打15-20次,使细胞沉淀完全吹散后再进⾏铺瓶,铺瓶后需将细胞与培养基混匀后再放置在培养箱中培养;SH-SY5Y细胞对温度敏感,因此在复苏和传代的操作中务必将培养基预热后使⽤。
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SH-SY5Y细胞常见问题处理方法

1. 如何预防SH-SY5Y细胞成团?

SH-SY5Y细胞非常敏感,在受到温度、化学或物理刺激后容易出现成团现象。一个视野下,有少量成团现象,无需特殊处理。成团几乎没有铺展开的细胞时,就需要按以下方法特殊处理一下了。

成团处理方法:
方法1:低密度接种,用0.125%的低浓度胰蛋白酶消化细胞(时间不超过5min),按1:6比例传代接种,并换新的培养器皿。延长换液时间,3天换液一次,防止细胞脱落。
方法2:使用多聚赖氨酸包被的培养器皿,以加快细胞贴壁速度,降低细胞聚集成团的几率。

方法3:重新铺板,并更换新配制的培养基,并加大血清比例(不超过20%)

方法4:接种时,减少培养基量(如T25加3mL)以加快细胞贴壁速度,等待细胞贴壁后(约8-12小时),再补加培养基。


预防成团的方法:

· 控制细胞密度不超过80%,当密度到达或超过80%及时传代;传代时切勿暴力吹打,避免对细胞造成机械刺激

· 使用质量好的培养基和胎牛血清,减少内毒素等有害物质对细胞的刺激

· 请勿频繁把细胞从培养箱拿出,气温低时需开暖气维持细胞房温度;使用PBS、培养基前37度预热,以避免温差对细胞造成刺激

2. SH-SY5Y细胞出现皱缩、脱落如何处理?
SH-SY5Y细胞出现皱缩处理方法

常温细胞拿到后,把细胞放进培养箱静置2-4小时即可。

如果4小时后细胞仍然没有铺展开,密度适中的前提下可以放培养箱中静置过夜(过夜前倒出部分培养基,留5-10mL在瓶中,瓶盖拧松)。

SH-SY5Y细胞出现脱落处理方法

常温细胞拿到后,先把细胞放进培养箱静置2-4小时以稳定状态再处理。

脱落后的细胞通常聚团漂浮,通过离心将漂浮的细胞团收集起来,在离心管里进行胰酶消化后重新铺板即可。
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SH-SY5Y细胞皱缩、脱落状态

SH-SY5Y 已发表过的文章:

IF=3.6 Mengzhen Z, Xinwei H, Zeheng T, et al. Integrated machine learning-driven disulfidptosis profiling: CYFIP1 and EMILIN1 as therapeutic nodes in neuroblastoma[J]. Journal of Cancer Research and Clinical Oncology, 2024, 150(3): 109.

IF=3.6 Feng J, Zhao J, Kuang Y, et al. Hsa_Circ_0105596/FTO inhibits progression of Parkinson's disease by sponging miR-187-3p and regulating eEF2[J]. Heliyon, 2024, 10(23).

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